Los vasos de plástico sellados y los congeladores de baja temperatura son herramientas esenciales que funcionan como un "botón de pausa" para la actividad biológica, preservando el estado de la muestra tal como estaba en el momento de la recolección.
Esta combinación termina eficazmente las actividades fisiológicas tanto de las abejas melíferas como de cualquier ácaro parásito. Al prevenir la descomposición e inmovilizar los especímenes, este proceso garantiza que los ácaros no se desprendan ni desaparezcan, asegurando la precisión del análisis cuantitativo y la identificación morfológica posteriores.
Conclusión principal La integridad de los datos de las abejas melíferas, ya sea para contar ácaros o analizar genética, depende completamente de la prevención del cambio biológico después de la recolección. Los vasos sellados proporcionan aislamiento físico para prevenir la contaminación cruzada, mientras que los congeladores (típicamente -20 °C) bloquean químicamente la muestra para detener la descomposición y la pérdida de parásitos.
Preservación de la integridad física y biológica
El objetivo principal de este protocolo de muestreo es garantizar que el espécimen analizado en el laboratorio sea idéntico al espécimen recolectado en el campo.
Inmovilización de huéspedes y parásitos
La aplicación inmediata de bajas temperaturas (aproximadamente -20 °C) es fundamental para detener la actividad fisiológica de la abeja melífera y sus parásitos.
Si las muestras permanecen activas o calientes, los ácaros parásitos pueden desprenderse de las abejas huésped. La congelación fija los ácaros en su lugar, asegurando que los recuentos de laboratorio reflejen los niveles reales de infestación de la colonia.
Prevención de la descomposición
Las abejas melíferas se descomponen rápidamente después de la muerte, lo que compromete la identificación morfológica.
El almacenamiento a baja temperatura inhibe la descomposición biológica de los tejidos. Esta preservación es necesaria para mantener la estructura física de la abeja para una inspección visual y recuento precisos.
Prevención de la contaminación cruzada
El uso de vasos de plástico sellados y estandarizados aísla la muestra del entorno externo.
Esta barrera física es vital para la detección precisa de la carga de patógenos, como las especies de Nosema o el Virus de la Parálisis Crónica de las Abejas (CBPV). Garantiza que los patógenos detectados en el laboratorio se originaron en esa colonia específica, no en muestras vecinas o herramientas de manipulación.
Garantía de precisión química y molecular
Más allá de los parásitos visibles, los investigadores a menudo analizan la composición química y genética de las abejas. Los métodos de almacenamiento impactan significativamente la validez de estos datos microscópicos.
Autenticidad del microbioma
Los contenedores de plástico estériles de grado industrial evitan la introducción de microorganismos ambientales.
Al analizar el microbioma de las abejas melíferas, es crucial que las bacterias detectadas provengan del sistema interno o de la superficie corporal de la abeja. Los contenedores estériles sellados garantizan que los resultados no se vean sesgados por impurezas o herramientas de muestreo no estériles.
Estabilidad de enzimas y lípidos
Mantener los entornos de almacenamiento entre -8 °C y -40 °C inhibe la degradación de las enzimas superficiales.
Este rango de temperatura también minimiza la pérdida de componentes lipídicos volátiles. La preservación de estos marcadores químicos asegura que los datos experimentales representen con precisión el estado fisiológico real de la abeja melífera en el momento de la captura.
Comprensión de las compensaciones
Si bien el método estándar de "vaso sellado y congelador" es robusto, diferentes objetivos analíticos requieren ajustes específicos en este protocolo.
Los límites de la congelación estándar (-20 °C)
Si bien -20 °C es suficiente para contar ácaros y morfología general, puede no ser lo suficientemente frío para todo el trabajo molecular.
Para el almacenamiento a largo plazo que involucra virus o patógenos sensibles, a menudo se requieren congeladores de temperatura ultrabaja (-80 °C). Este frío extremo bloquea las estructuras moleculares de manera más efectiva, previniendo la degradación de los ácidos nucleicos en análisis de varios años.
La excepción de la "muestra viva"
La congelación es destructiva para la vida de la abeja, lo cual es aceptable para la mayoría de los análisis estructurales y químicos.
Sin embargo, si el objetivo principal es obtener ARN de alta calidad y no degradado para el monitoreo del título viral, la congelación inmediata después de la recolección puede no ser siempre el mejor enfoque. En estos casos específicos, se utilizan contenedores ventilados con alimento azucarado para transportar las abejas vivas al laboratorio, ya que mantener al huésped vivo previene la degradación del ARN hasta el momento de la extracción.
Tomando la decisión correcta para su objetivo
Seleccione su protocolo de almacenamiento y recolección en función de los datos específicos que pretende extraer de la muestra.
- Si su enfoque principal es la Cuantificación de Parásitos (Ácaros): Utilice vasos sellados y congeladores de -20 °C para inmovilizar los ácaros y evitar que se desprendan del huésped.
- Si su enfoque principal es el Análisis del Microbioma: Priorice contenedores sellados estériles de grado industrial para prevenir estrictamente la contaminación bacteriana ambiental.
- Si su enfoque principal es el Cribado de Virus a Largo Plazo: Utilice congeladores de temperatura ultrabaja (-80 °C) para garantizar la máxima estabilidad de los ácidos nucleicos y las estructuras moleculares.
- Si su enfoque principal es la Extracción de ARN de Alta Calidad: Considere transportar abejas vivas en contenedores ventilados con alimento para prevenir la degradación del ARN antes del trabajo de laboratorio.
Los datos fiables comienzan con una muestra que ha sido físicamente aislada y térmicamente estabilizada para limitar estrictamente el cambio biológico.
Tabla resumen:
| Factor de preservación | Herramienta de almacenamiento | Beneficio principal |
|---|---|---|
| Carga de parásitos | Vasos sellados + Congelador de -20 °C | Inmoviliza ácaros; previene el desprendimiento y la pérdida del huésped. |
| Morfología | Congelador de baja temperatura de -20 °C | Detiene la descomposición; mantiene la estructura física para la identificación. |
| Integridad del microbioma | Contenedores sellados estériles | Previene la contaminación cruzada de bacterias ambientales. |
| Estabilidad química | Almacenamiento de -8 °C a -40 °C | Inhibe la degradación de enzimas y la pérdida de lípidos volátiles. |
| Investigación molecular | Congelador ultrabajo de -80 °C | Previene la degradación de ácidos nucleicos y ARN para estudios a largo plazo. |
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Referencias
- Ivana Tlak Gajger, Maja Ivana Smodiš Škerl. Effectiveness of the innovative remedy ApiBonum ib on honeybee colony vitality. DOI: 10.46419/cvj.57.1.7
Este artículo también se basa en información técnica de HonestBee Base de Conocimientos .
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